Uso Previsto:

El kit ImmuKnow TM de Cylex ® ( Immune Cell Function Assay) detecta la inmunidad mediada por células (CMI) midiendo la concentración de ATP producido por los linfocitos CD4 tras estimulación. Esta medida se realiza a partir de una muestra de sangre total utilizando un luminómetro y el reactivo luciferin/luciferase. El ensayo es utilizado para la cuantificación de la actividad inmune celular en población inmunosuprimida.

Explicación :

El sistema inmune está formado por dos tipos de inmunidad: la humoral y la mediada por células (CMI). CMI está mediada por los Linfocitos T y su medición tiene una gran variedad de aplicaciones: control del estado de pacientes transplantados, control de enfermedades infecciosas (VIH, HCV), autoinmunidad, cáncer. Los linfocitos estimulados experimentan un incremento en la síntesis de ATP. La tecnología de Cylex ® combina la estimulación celular, la selección celular, y la cuantificación de marcadores metabólicos (ATP) para medir la CMI.

ImmuKnow TM mide la respuesta temprana a la estimulación detectando la síntesis de ATP intracelular sintetizado por las células CD4 seleccionadas a partir de sangre total mediante anticuerpos unidos a beads magnéticos. La cantidad de ATP presente en la sangre estimulada es una medida de la actividad de los linfocitos, la cual permite conocer el grado de función celular inmune, información muy útil para los clínicos en el control del estado de un paciente transplantado.

Principio del ensayo :

detecta la inmunidad mediada por células en sangre total después de 15-18 horas de incubación con estimulante. Durante la incubación, se incrementa la síntesis de ATP dentro de las células que responden a la estimulación con phytohemaglutinina (PHA). Al mismo tiempo, se incuba sangre total en ausencia de estimulación para comprobar la actividad basal de ATP. Se añaden anticuerpos anti-CD4 unidos a beads magnéticos tanto a los pocillos con sangre estimulada como no estimulada. Se seleccionan las células CD4 mediante placa magnética, se añade reactivo de lisis para liberar el ATP intracelular. Se añade el reactivo de luminiscencia y se mide la cantidad de ATP presente en la muestra por la siguiente reacción:

Mg 2+Luciferasa Luciferin + ATP +O 2 Oxyluciferin + AMP+ Pirofosfato + CO 2 + Luz

La cantidad de luz producida se mide mediante un luminómetro (máxima emisión a 562 nm), la luz emitida es proporcional a la concentración de ATP. La concentración de ATP (ng/mL) se calcula a partir de una curva de calibración, de la que se obtiene la cantidad de ATP presente en la muestra.

Cylex recibe los certificados ISO 9001:2000 e ISO 13485:2003