Sepsis Pathogenic Microorganism Detection Kit (Digital PCR)

Kit de diagnóstico in vitro basado en PCR digital en gotas (droplet digital PCR, dPCR) para la detección de microorganismos patógenos asociados a sepsis a partir de ADN extraído de muestras clínicas. El kit permite identificar y cuantificar patógenos sin requerir hemocultivo, cubriendo 21 agentes frecuentes en infecciones del torrente sanguíneo.

Descripción Detallada

Principio de funcionamiento

El kit Sepsis Pathogenic Microorganism Detection Kit (Digital PCR) utiliza tecnología de PCR digital en gotas combinada con sondas fluorescentes TaqMan para detectar fragmentos génicos específicos de diferentes microorganismos patógenos. Cada diana se identifica mediante sondas fluorescentes de uno o dos colores y, mediante la combinación de sondas en diferentes proporciones, el sistema permite detectar múltiples patógenos de forma simultánea en un mismo pocillo.

Durante el procedimiento, el ADN microbiano extraído de la muestra se distribuye aleatoriamente en miles de gotas encapsuladas en aceite dentro del cartucho de PCR digital. Tras la amplificación, las señales fluorescentes de cada gota se analizan mediante métodos estadísticos basados en distribución de Poisson, permitiendo la detección precisa de los microorganismos presentes.

El ensayo se organiza en dos mezclas o paneles principales, Sepsis Buffer 1 y Sepsis Buffer 2, que se procesan por separado para cada muestra y para los controles. Cada reacción tiene un volumen final de 20 µl e incluye mezcla enzimática, buffer específico, agua libre de nucleasas y ADN de muestra o control.

Aplicaciones clínicas

El kit está diseñado para la detección de diversos patógenos implicados en sepsis, una condición potencialmente mortal causada por la invasión microbiana del torrente sanguíneo. La documentación indica que la infección del torrente sanguíneo es un precursor de la sepsis y puede estar causada por bacterias, virus y hongos. El producto permite identificar tipos y cargas de microorganismos patógenos en sangre sin necesidad de hemocultivo. 21 agentes patógenos frecuentes en infecciones del torrente sanguíneo, incluyendo bacterias Gram negativas, bacterias Gram positivas y hongos.

Esquema de funcionamiento del kit de sepsis por PCR digital

Microorganismos detectados

El kit detecta los siguientes patógenos incluidos en los dos paneles CE-IVD:

Panel 1	Panel 2
Staphylococcus capitis Acinetobacter baumannii Candida tropicalis Candida krusei Staphylococcus epidermidis Enterococcus faecium Cryptococcus neoformans Stenotrophomonas maltophilia Klebsiella pneumoniae Streptococcus pneumoniae Serratia marcescens	Bacteroides fragilis Escherichia coli Candida parapsilosis Candida glabrata Enterobacter cloacae complex Enterococcus faecalis Haemophilus influenzae Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Candida albicans El Panel 2 incluye además un control interno.

Beneficios

Permite la detección molecular directa de patógenos asociados a sepsis mediante PCR digital, sin depender del crecimiento en hemocultivo. Proporciona identificación rápida y precisa de ácidos nucleicos microbianos en sangre total, orientada a facilitar un tratamiento más rápido y dirigido. El flujo de RainSure permite trabajar con 3 ml de sangre y obtener resultados en un promedio de 3-5 horas. Ofrece cuantificación absoluta, alta sensibilidad y detección rápida, según la comparación tecnológica incluida en la documentación técnica. Permite detectar coinfecciones y múltiples patógenos en una misma muestra, de acuerdo con la descripción técnica del producto.

Resultados o indicadores clave

La interpretación de resultados se basa en el recuento de gotas positivas respecto al límite de blanco (Limit of Blank, LoB) definido para cada diana. Para todos los patógenos incluidos en los paneles, el valor positivo indicado es ≥3 gotas positivas.

Si el número de gotas positivas de una diana supera el LoB, la muestra se informa como positiva para ese patógeno. Si el número de gotas positivas es inferior al LoB, la muestra se informa como negativa. Si el número de gotas positivas es equivalente al LoB, se recomienda repetir el ensayo con el volumen máximo de muestra; si la repetición supera el LoB, el patógeno se informa como positivo.

Tecnología utilizada

El producto está basado en droplet digital PCR con detección fluorescente multicanal. El sistema compatible indicado en la IFU es RainSure DropX-2250 series digital PCR system, con cinco canales de fluorescencia: FAM, HEX, ROX, Cy5 y Cy5.5.

Público/usuario previsto

Personal de laboratorio cualificado y formado en técnicas de dPCR.

Consideraciones o limitaciones

El kit está destinado a diagnóstico in vitro (IVD). Los resultados pueden verse afectados por la recogida, manipulación, transporte y almacenamiento de la muestra. La contaminación cruzada puede producir falsos positivos. Una recogida, transporte o manipulación inadecuados puede generar falsos negativos. Variaciones en las secuencias diana analizadas también pueden causar falsos negativos. El uso está restringido a los tipos de muestra y sistemas de análisis indicados, incluyendo modelos instrumentales, reactivos de extracción de ácidos nucleicos y métodos aplicables.

Aspectos Clave

Kit IVD para detección de patógenos asociados a sepsis.

Tecnología droplet digital PCR con sondas TaqMan.

Detección de 21 microorganismos frecuentes en infecciones del torrente sanguíneo.

Incluye bacterias Gram positivas, bacterias Gram negativas y hongos.

Permite detección sin hemocultivo.

Compatible con sistema RainSure DropX-2250.

Análisis multicanal: FAM, HEX, ROX, Cy5 y Cy5.5.

Interpretación basada en gotas positivas y límite de blanco LoB ≥3.

Tiempo medio indicado en el material técnico: 3-5 horas.

Permite cuantificación absoluta y detección de múltiples patógenos en una misma muestra.

Detalles de Presentación

Formato y referencia

Producto: Sepsis Pathogenic Microorganism Detection Kit (Digital PCR) Referencia: 3.02.03.0007 Presentación: 24 tests/kit Uso: Diagnóstico in vitro (IVD)

Componentes del kit

Sepsis Buffer 1: 1 vial de 210 µl. Contiene dNTPs, MgCl₂, KCl, Tris-HCl y primers/sondas para los patógenos del Panel 1. Sepsis Buffer 2: 1 vial de 210 µl. Contiene dNTPs, MgCl₂, KCl, Tris-HCl, primers/sondas para los patógenos del Panel 2 y primers/sondas de control interno. Enzyme Mix: 1 vial de 60 µl, con Taq DNA polymerase. Sepsis Positive Control: 1 vial de 160 µl, con plásmidos correspondientes a las dianas del kit y al control interno. Sepsis Negative Control: 1 vial de 160 µl, agua libre de DNasa/RNasa.

Condiciones de almacenamiento

Conservar protegido de la luz a temperatura inferior a -15 °C. Vida útil: 12 meses. Evitar más de 7 ciclos de congelación/descongelación.

Tipos de muestra

La IFU indica los siguientes tipos de muestra:

Sangre periférica con anticoagulante EDTA. Esputo. Lavado broncoalveolar. Líquido cefalorraquídeo. Líquido pleural y abdominal. Orina. Pus.

Materiales requeridos no incluidos

Aceite de generación de gotas para sondas RainSure. Cartucho de PCR digital RainSure. Cubiertas de sellado RainSure. Agua libre de nucleasas. Puntas con filtro. Tubos de centrifugación de baja unión, libres de nucleasas. Pipeta, centrífuga y vórtex.

Área:

CMI rápida-Sepsis, Microbiología

Tecnología:

PCR Digital

Marca:

RainSure

Consulta a nuestros expertos

Información básica sobre protección de datos
- Responsable: Diagnóstica Longwood S.L.
- Finalidad: Responder las consultas planteadas por el usuario y enviarle la información solicitada
- Legitimación: Consentimiento del usuario
- Destinatarios: Solo se realizan cesiones si existe una obligación legal.
- Derechos: Acceder, rectificar y suprimir, así como otros derechos, como se indica en la Política de Privacidad
Puede consultar la información completa en nuestra Política de Privacidad.