Violet 3.0 & QF-Pro® Technology

La biología espacial convencional indica dónde están las proteínas; Violet 3.0 y la tecnología QF-Pro® revelan qué están haciendo. La mayoría de los ensayos proteómicos actuales se limitan a medir los niveles de expresión molecular, pasando por alto si las proteínas están realmente activadas o interactuando entre sí. En campos críticos como la inmunooncología, la neurobiología y el desarrollo de fármacos, la relación entre la expresión y la función real de las proteínas suele estar desacoplada, lo que limita enormemente el valor predictivo de los biomarcadores convencionales y conduce al fracaso de numerosas estrategias terapéuticas.

Desarrollada por Hawk Biosystems, la tecnología patentada QF-Pro® (Quantifying Functions in Proteins) es la primera y única plataforma capaz de cuantificar espacialmente la función de las proteínas in situ con una resolución nanoscópica inferior a 10 nm, directamente en muestras biológicas complejas como tejidos fijados en formalina e incluidos en parafina (FFPE) y cultivos celulares.

A través del equipo de bioimagen todo en uno Violet 3.0 y sus kits de reactivos optimizados, QF-Pro® traduce los perfiles de expresión estáticos en mapas dinámicos de función molecular. Al medir interacciones proteína-proteína (PPI), modificaciones postraduccionales (PTM) como la fosforilación, y estados de activación de receptores a escala nanométrica, esta solución proporciona una capa de información funcional oculta para otras tecnologías ómicas.

Aspectos Clave

Verdadera cuantificación funcional a <10 nm: QF-Pro® opera como una regla bioquímica molecular, detectando interacciones y uniones físicas reales únicamente cuando las moléculas están en contacto directo (1–10 nm). Supera las limitaciones de los ensayos de proximidad (PLA, ~40 nm) y de la colocalización por inmunofluorescencia convencional (~200 nm), que informan de proximidad espacial pero no de interacción biológica real.

Innovador sistema de amplificación de señal: Incorpora una química de amplificación de señal patentada que supera por completo la autofluorescencia natural del tejido FFPE clínico, garantizando una relación señal-ruido óptima y una sensibilidad analítica sin precedentes.

Plataforma de bioimagen Benchtop «Plug-and-Play»: El instrumento Violet 3.0 simplifica drásticamente la microscopía FRET-FLIM. Diseñado para su uso rutinario en cualquier laboratorio, elimina la necesidad de contar con especialistas en física u óptica compleja gracias a un flujo de trabajo intuitivo y automatizado.

Multiplexación funcional y fenotípica: Permite caracterizar simultáneamente hasta 4 perfiles de expresión de biomarcadores mediante inmunofluorescencia estándar junto con 1 mapa funcional QF-Pro® de alta resolución en la misma sección de tejido.

Resultados reproducibles y listos para la clínica: Al basarse en la medición del tiempo de vida de la fluorescencia (FLIM) —un parámetro físico intrínseco e independiente de la concentración de fluoróforos o de la intensidad de iluminación—, el QF-Pro® Score generado es altamente cuantitativo, robusto y directamente comparable entre diferentes lotes, laboratorios y cohortes clínicas.

¿Cómo funciona?

La tecnología QF-Pro® se basa en la combinación de un ensayo de unión de dos sitios basado en anticuerpos, la transferencia de energía de resonancia de Förster (FRET) amplificada y la microscopía de imágenes por tiempo de vida de fluorescencia (FLIM).

Principio de Funcionamiento FRET-FLIM:

Marcaje específico de dos sitios: Se emplean dos anticuerpos primarios de especies distintas dirigidos contra dos epítopos de interés (ya sean dos proteínas que interactúan o una proteína y su sitio de modificación postraduccional).

Detección secundaria QF-Pro®: Se aplican anticuerpos secundarios específicos acoplados a un fluoróforo cromóforo donador (verde) y a un aceptor químico amplificado (rojo).

Transferencia de Energía FRET: Si los epítopos están en contacto físico real (entre 1 y 10 nm de distancia), se produce una transferencia de energía no radiativa desde el donador excitado hacia el aceptor.

Medida de Tiempo de Vida (FLIM) en Violet 3.0: El instrumento mide con precisión de picosegundos el decaimiento del tiempo de vida de la fluorescencia del donador. Cuando ocurre FRET, el tiempo de vida del donador se reduce significativamente. Violet 3.0 escanea la muestra píxel a píxel para registrar esta reducción.

Generación del QF-Pro® Score: El software propietario calcula automáticamente la eficiencia de FRET en cada región de interés (ROI), traduciéndola en un valor numérico continuo (Score) y en un mapa funcional espacial de alta resolución sin necesidad de ajustes manuales de curvas o interpretación subjetiva.

Especificaciones Técnicas

Parámetro	Especificación de Violet 3.0 / Reagent Kits
Tecnología de medición	FRET-FLIM Amplificado (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy por modulación de frecuencia) con química de amplificación de señal patentada.
Resolución analítica	Límites nanométricos estrictos de interacciones moleculares entre 1 y 10 nm.
Capacidad de multiplexación	Hasta 4 canales de inmunofluorescencia estándar (perfilado de expresión de biomarcadores) + 1 mapa funcional QF-Pro® en una misma lectura.
Formatos de muestra soportados	Compatible con portaobjetos de vidrio convencionales (capacidad para hasta 4 portaobjetos por carga en soporte intercambiable) y placas multipocillo estándares para ensayos celulares in vitro.
Fuentes de excitación	Láser modulado de alto rendimiento para FLIM y sistema de iluminación LED multicanal de 4 vías para inmunofluorescencia convencional.
Objetivos disponibles	Equipado con objetivos secos de alta apertura numérica de 10x, 20x y 40x.
Rendimiento del Kit de reactivos	Estabilidad garantizada de 6 meses desde su recepción. Cada kit incluye reactivos secundarios optimizados para procesar hasta 100 portaobjetos FFPE o 1 placa de 96 pocillos.
Software de análisis	Suite de software QF-Pro® con interfaz intuitiva, mapeo automatizado de ROIs, cálculo directo del QF-Pro® Score, aplicación de umbrales clínicos y exportación directa de datos a Excel y reportes visuales a PowerPoint/PDF.
Mantenimiento	Formato compacto Benchtop de sobremesa. Libre de mantenimiento, calibración óptica compleja o consumibles de alineación láser habituales en equipos FLIM clásicos.

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Área:

Proteómica, Ómicas

Tecnología:

Ensayo Funcional

Marca:

Hawk Biosystem

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