ForenSeq® DNA Signature PLUS Kit

Descripción detallada

Principio de funcionamiento

Basado en tecnología de amplicones, ForenSeq® DNA Signature Plus Kit genera librerías de ADN con doble indexado para secuenciación en la plataforma MiSeq FGx. Cada muestra se combina con una mezcla de primers específicos etiquetados para cada secuencia diana. Una primera PCR multiplex amplifica los targets seleccionados. Mediante una segunda PCR se incorporan índices duales únicos (UDI) para cada una de las muestras y se enriquecen los productos amplificados. Las librerías resultantes son purificadas y normalizadas con beads magnéticos y finalmente se agrupan en un pool listo para la secuenciación. El kit incluye todos los reactivos necesarios para todas las fases de la preparación de librerías, y el ADN control NA24385.

Este kit permite la amplificación de marcadores tipo STR y SNP en una misma reacción, generando un perfil que combina distintas categorías de marcadores forenses, presentando dos opciones de contenido (DPMA o DPMB) según el objetivo del estudio. El mix DPMA amplifica 27 STRs autosómicos, 24 Y-STRs, 7 X-STRs y 94 SNPs informativos de identidad; el mix DPMB aporta además 22 SNPs informativos de fenotipo (color de ojos y color de pelo) y 56 SNPs informativos de ascendencia biogeográfica.

ForenSeq® DNA Signature Plus Kit es aplicable a distintos tipos de muestra de partida. Está validado para muestras de ADN purificado, lisados de hisopos bucales o punches directos de tarjetas FTA. Además, se dispone de un buffer de PCR opcional ForenSeq® Enhanced PCR1 Buffer (ePCR1), especialmente diseñado para muestras con inhibidores, como ácido húmico o hematina.

Los resultados obtenidos se analizan mediante un módulo específico en el UAS incluido en un servidor dedicado. El servidor con el software UAS, instalado de forma independiente, recibe los datos y ejecuta el análisis correspondiente al ensayo: generación de FASTQ, alineamiento, llamada de variantes y emisión de resultados.

El equipo MiSeq FGx trabaja con dos cartuchos de reactivos de diferente capacidad, lo que permite optimizar las carreras de secuenciación en base al número de muestras y a su naturaleza. Las recomendaciones para casos forenses contemplan posibles mezclas, ADN disponible inferior a 1 ng o degradación parcial. En el caso de las muestras de referencia, la capacidad de multiplexación es mayor.

Aplicaciones

El elevado número de marcadores, su distinta naturaleza y la distribución en dos mixes de primers diferentes hacen de ForenSeq® DNA Signature Plus un kit muy versátil que puede apoyar al genetista forense en distintas aplicaciones:

Público usuario previsto

Laboratorios de genética forense, identificación humana y pruebas de parentesco que necesiten un elevado número de marcadores para resolver casos de identificaciones o parentescos complejos.

Aspectos clave